通道載玻片--新的免疫熒光方法
細胞的免疫熒光實驗是一個基礎的細胞實驗,傳統(tǒng)的方法是在培養(yǎng)板中放入預先處理好的蓋玻片,待細胞貼壁后,使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進行固定,染色等系列工作。
現(xiàn)在分享一種簡便的免疫熒光方法,無需爬片,培養(yǎng)-操作-鏡檢,在一個培養(yǎng)皿/載玻片上完成所有工作!一氣呵成!
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使用如圖的培養(yǎng)皿和載玻片,免疫熒光步驟將簡化為:
1.直接細胞培養(yǎng)
2.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
3.固定細胞
4.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
5.染色
6.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
7.凍存液處理細胞
8.直接鏡檢觀察
免去了指甲油封片的傳統(tǒng)免疫熒光方法中的冗長步驟:
1.無需對蓋玻片和載玻片消毒滅菌
2.無需對蓋玻片進行包被
3.無需等細胞爬片
4.無需指甲油封片
之所能如此簡便完成免疫熒光實驗,是因為這些ibidi培養(yǎng)皿和載玻片的底部為特殊處理的材質,絕大多數(shù)細胞可以直接貼壁生長,而不需要另外包被。同時,這些耗材的底部薄如蓋玻片,可以直接使用倒置顯微鏡進行觀察,得到高質量的成像,適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。
成像效果:
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下面再分享一種極致的免疫熒光方法,不僅更加簡化實驗步驟,而且可以節(jié)約試劑和細胞,同時還能得到理想的成像效果。
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如圖的ibidi通道載玻片,簡單快速完成免疫熒光實驗。
步驟:培養(yǎng)-固定-染色-鏡檢,只需在這個載玻片上進行4個步驟,免疫熒光實驗輕松完成~
優(yōu)點總結:
1、節(jié)約細胞和試劑
ibidi通道載玻片里的通道只有400μm高,以μ-slide VI為例,通道的容積只有30μl,而普通8well的腔式載玻片一個孔的容積有300μl。這意味著通道需要的試劑和細胞量僅需約十分之一!對于非常珍貴的細胞和試劑來說,這可是非常重要的。
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2、成像效果好
使用通道載玻片時,能在相差顯微鏡下獲得更好的成像效果。因為通道上下都是平坦的,不會因為凹液面的折射現(xiàn)象影響到相差顯微鏡成像。而well式的開放小室的相差成像會受到培養(yǎng)皿蓋和液面的折射現(xiàn)象影響。
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3、胞分布均勻
在通道載玻片中,由于沒有培養(yǎng)皿壁的影響,鋪入細胞后,不需要平時的混勻操作,細胞的分布就非常均勻了。而使用開放小室,有可能在鋪細胞混勻后,細胞還是會聚集在小室的邊緣或中心上。如下圖所示。a 是明場相差成像,b為熒光成像。
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免疫熒光本身就是個十分基礎的實驗,如今的科技更是便利了實驗,實驗也發(fā)展了科技。
以上方法分享給有需要的,奔跑在科研前沿的童鞋們~更快更省地做好免疫熒光噢!